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Avaliação dos genes normalizadores para cultivo primário de células murais da granulosa e do Cumulus oophorus luteinizadas

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Avaliação dos genes normalizadores para cultivo primário de células murais da granulosa e do Cumulus oophorus luteinizadas

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Título Avaliação dos genes normalizadores para cultivo primário de células murais da granulosa e do Cumulus oophorus luteinizadas
Autor Schneider, Júlia
Orientador Brum, Ilma Simoni
Co-orientador Alcoba, Diego Duarte
Data 2014
Nível Graduação
Instituição Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Instituto de Ciências Básicas da Saúde. Curso de Biomedicina.
Assunto Células da granulosa
Cultura primária de células
Expressão gênica
Reação em cadeia da polimerase em tempo real
Técnicas de maturação in vitro de oócitos
Resumo Atualmente, as estratégias de avaliação e de seleção de oócitos destinados à maturação in vitro (MIV) dependem principalmente da morfologia do complexo cumulus-oócito (CCO). Porém, este método possui precisão menor do que a desejada, visto que oócitos não competentes muitas vezes são selecionados. Portanto, técnicas in vitro não invasivas de avaliação da qualidade do oócito para maturação e posterior fertilização in vitro (FIV) estão em desenvolvimento. Dentre estas, destaca-se a seleção de oócitos através da utilização do corante de vitalidade Azul Cresil Brilhante (BCB). Em várias espécies animais a utilização do BCB já está consolidada; no entanto, os efeitos causados por este corante em embriões humanos provenientes de oócitos submetidos a esta técnica ainda não foram elucidados. Visto que a utilização de oócitos humanos para pesquisa é bastante restrita e que as células murais da granulosa (GC) e do cumulus oophorus (CC) apresentam íntima relação com o oócito na formação do folículo ovariano, a utilização do BCB nestas células permite elucidar de forma indireta, o possível efeito do BCB sobre oócitos humanos. A análise da expressão gênica de genes alvo que possam ter sido alterados após utilização do BCB é uma importante metodologia para identificar presença ou ausência de efeitos causados por este corante nos oócitos. Para que os resultados do perfil de expressão gênica sejam confiáveis é necessária a utilização de uma estratégia de normalização. O uso de genes normalizadores é tido como padrão-áureo para a normalização de resultados de RT-qPCR até o momento; porém, uma vez que não há um gene de referência universal, este deve ser determinado conforme o tipo de amostra utilizado. Desta forma, este estudo buscou avaliar e validar, dentre cinco candidatos, os genes normalizadores mais adequados para estudos de expressão gênica com cultura primária de GC e CC. Utilizando software específico para a determinação de genes normalizadores, este trabalho apresenta ACTB e HPRT-1 como sendo os mais adequados genes normalizadores dentre os analisados, para estudos de expressão gênica em cultura primária de células murais da granulosa e do cumulus oophorus, respectivamente.
Tipo Trabalho de conclusão de graduação
URI http://hdl.handle.net/10183/109725
Arquivos Descrição Formato
000949974.pdf (2.041Mb) Texto completo Adobe PDF Visualizar/abrir

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