High biodegradation levels of 4,5,6-trichloroguaiacol by Bacillus sp. isolated from cellulose pulp mill effluent

Abstract

Isolou-se uma bactéria gram positiva, esporulada a partir de efluente de fábrica de polpa de celulose. Esse microrganismo, identificado como Bacillus sp. e nomeado IS13, foi capaz de degradar rapidamente o composto orgânico clorado 4,5,6-tricloroguaiacol (4,5,6-TCG) presente em meio de cultura a uma concentração de 50mg/L. Essa concentração equivale a 3x104 vezes mais 4,5,6-TCG que a concentração encontrada no efluente original. A biodegradação desse composto foi analisada por espectrofotometria de varredura e cromatografia gasosa. A falta de sub-produtos de degradação sugeriu a verificação da possibilidade de adsorção e absorção celular do 4,5,6-TCG ao invés de biodegradação propriamente dita. Não foram encontrados traços de 4,5,6-TCG após lise celular com lisozima e SDS e não houve desprendimento desse composto após agitação vigorosa. Logo, o desaparecimento do 4,5,6-TCG do meio de cultura analisado foi interpretado como biodegradação devido ao metabolismo do Bacillus sp. IS13. A partir desse microrganismo, buscou-se isolar plasmídeos utilizando diferentes protocolos. (Continuatição) Os melhores resultados foram obtidos através do método do CTAB, porém não encontraram-se plasmídeos no isolado IS13. Os resultados sugerem que a alta taxa de degradação do 4,5,6-TCG é mediada por genes presentes no cromossomo bacteriano. A importância desse trabalho encontra-se na possibilidade de utilização do Bacillus sp. IS13 como inóculo em plantas de efluentes industriais, a fim de biodegradar compostos orgânicos clorados presentes nesses locais.

An aerobic Gram positive spore-forming bacterium was isolated from cellulose pulp mill effluent. This microorganism, identified as Bacillus sp. and named IS13, was able to rapidly degrade the organic chlorinated compound 4,5,6-trichloroguaiacol (4,5,6-TCG) from a culture containing 50 mg/l, which corresponds to about 3x104 times the concentration found in the original effluent. The biodegradation of this compound, usually found in cellulose pulp mill effluents, was evaluated by spectrophotometry and gas chromatography analysis. During 4,5,6-TCG decreasing, the lack of by-products had shown by such analysis lead to verify the possibility of either adsorption or absorption of 4,5,6-TCG by the cells, instead of real biodegradation. There were no traces of 4,5,6-TCG after lysozyme and SDS cell disruption. Vigorous extraction was applied before spectrophotometry analysis and there was no release of residual 4,5,6-TCG. Plasmid isolation was attempted by using different protocols. The best results were reached by CTAB method, but no plasmid DNA was found in Bacillus sp. IS13. The results suggest that genes located at the bacterial chromosome might mediate the high decrease of 4,5,6-TCG. The importance of this work is that, in being a natural ocurring microorganism, Bacillus sp. IS13, can be used as inoculum in plant effluents to best organochlorinated compounds biodegradation.