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Transfecção de DNA de BoHV-5 com fosfato de cálcio em diferentes tipos de cultivos celulares

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Transfecção de DNA de BoHV-5 com fosfato de cálcio em diferentes tipos de cultivos celulares

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Título Transfecção de DNA de BoHV-5 com fosfato de cálcio em diferentes tipos de cultivos celulares
Outro título Transfection of BoHV-5 DNA with calcium phosphate in different types of cell culture
Autor Dornelles, Eduardo Bortoluzzi
Rijsewijk, Franciscus Antonius Maria
Roehe, Paulo Michel
Simonetti, Amauri Braga
Resumo As condições para uma transfecção eficaz pelo método de fosfato de cálcio podem variar substancialmente. Neste estudo foi testado o tipo de cultivo celular mais apropriado para transfecção de DNA de herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) por esta técnica. Primeiramente foi avaliada a capacidade de multiplicação do BoHV-5 em três diferentes tipos de células. Para isto, a concentração viral foi calculada pelo método de dose infectante para cultivo celular / 50% (TCID50/mL). O BoHV-5 foi titulado em células de linhagem de rim de macaco verde Africano (VERO), células de linhagem de rim de suíno (PKsC3), células primárias de testículos de terneiro (TT) e células de linhagem de rim de bovino (MDBK). Em células VERO e PKsC3 a concentração viral máxima obtida foi 103,3 TCID50/mL, enquanto que em células MDBK o título foi de 106,8 TCID50/mL, similar ao encontrado para as células TT. Para avaliar a eficácia da transfecção nessas células, foi utilizado DNA plasmideal expressando um gene repórter (EGFP). Os resultados mostraram um valor de 4,5% de células fluorescentes para células TT, de 2,9% para PKsC3, de 0,5% para VERO e de 0,05% para MDBK. Quando células PKsC3 e TT foram transfectadas com 0,5 μg de DNA purificado de BoHV-5, somente as células TT apresentaram resultado positivo, com duas placas virais por poço. Para investigar a influência da concentração de DNA viral, células TT foram transfectadas com 0,5 μg e 1 μg de DNA purificado de BoHV-5, produzindo duas e quatro placas, respectivamente. Nas condições experimentais testadas neste estudo os resultados indicam que as células TT poderiam ser boas candidatas para serem utilizadas para a transfecção de DNA de BoHV-5.
Abstract The conditions for an efficacious transfection by calcium phosphate method can vary substantially. In this study the most appropriate cell type for transfection of bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5) DNA using this technique was tested. It was first evaluated the capacity of BoHV-5 multiplication in three different cell types. For this purpose virus concentration was calculated by tissue culture infectious dose 50% assay (TCID50/mL). BoHV-5 was titrated in kidney cells from African green monkey (VERO), cell clone of pig kidney (PKsC3), primary cell culture of calf testis (TT) and bovine kidney cells (MDBK). In Vero and PK15 cells maximum virus concentration reached 103,3 TCID50/mL, whereas in MDBK cells the titre was 106,8 TCID50/mL, similar to that of TT cells. In order to evaluate the transfection efficacy in these cells, plasmid DNA expressing a reporter gene (EGFP) was used. Results showed 4.5% fluorescent cells for TT, 2.9% for PKsC3, 0.5% for VERO and 0.05% for MDBK cells. When PKsC3 and TT cells were transfected with 0.5 mg of BoHV-5 purified DNA, only TT cells gave positive result with two plaques per well. To investigate the influence of viral DNA concentration, TT cells were then transfected with 0.5 mg and 1.0 mg of purified BoHV-5 DNA producing two and four plaques, respectively. Under experimental conditions tested in this study the results indicate that TT cells could be good candidates to be used for transfection of BoHV-5 DNA.
Contido em Acta scientiae veterinariae. Porto Alegre, RS. Vol. 38, n. 1 (2010), p. 31-35
Assunto Fosfatos de cálcio
Herpesvírus bovino tipo 5
Transfecção
[en] BoHV-5
[en] Calcium phosphate
[en] Calf testicle cells
[en] Transfection
Origem Nacional
Tipo Artigo de periódico
URI http://hdl.handle.net/10183/23963
Arquivos Descrição Formato
000734969.pdf (126.0Kb) Texto completo Adobe PDF Visualizar/abrir

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