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Confecção e seleção in vitro de mutantes com virulência atenuada de cepa apec por mutagênese marcada com assinatura

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Confecção e seleção in vitro de mutantes com virulência atenuada de cepa apec por mutagênese marcada com assinatura

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Título Confecção e seleção in vitro de mutantes com virulência atenuada de cepa apec por mutagênese marcada com assinatura
Autor Pavanelo, Daniel Brisotto
Orientador Horn, Fabiana
Co-orientador Matter, Leticia Beatriz
Data 2010
Nível Graduação
Instituição Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Instituto de Ciências Básicas da Saúde. Curso de Biomedicina.
Assunto Bactérias
Escherichia coli
Mutagenese
Resumo A Escherichia coli patogênica aviária (APEC) é o principal agente da colibacilose aviária. Ainda não há um patotipo estabelecido para APEC, mas diversos genes associados à virulência já foram descritos para essa bactéria. Dentre as diversas cepas estudadas de APEC, destaca-se a MT 78, que possui 20 de 33 fatores associados à virulência testados, causa morte celular em macrófagos aviários e é capaz de invadir células não-fagocitárias (fibroblastos aviários de linhagem). Para investigar qual gene da MT 78 é essencial para que a cepa invada células não-fagocitárias, foi construída uma biblioteca de 1800 mutantes dessa cepa, através da técnica de mutagênese marcada com assinatura (STM). Foram feitos ensaios de invasão com metade dos mutantes (900); a outra metade também será testada. Os ensaios consistem na infecção de fibroblastos aviários de linhagem e recuperação das bactérias intracelulares após 4 horas; o DNA dos mutantes será extraído e será possível detectar quais os mutantes presentes na infecção e ausentes na recuperação dos experimentos. Esses mutantes serão investigados devido à perda da capacidade de invasão. Será possível descobrir qual(is) o(s) gene(s) que sofreu(ram) mutação, e fazer ensaios moleculares com os mutantes atenuados. Os principais resultados desse trabalho, até o momento, são a construção da biblioteca de mutantes e a padronização da técnica de STM in vitro.
Tipo Trabalho de conclusão de graduação
URI http://hdl.handle.net/10183/54889
Arquivos Descrição Formato
000855576.pdf (744.8Kb) Texto completo Adobe PDF Visualizar/abrir

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