Análise molecular das proteínas do podócito na nefrite lúpica e sua correlação com o tipo histológico e grau de atividade da doença

Abstract

Introdução: A etiopatogenia da nefrite lúpica (NL) ainda não está clara. A deposição de imunocomplexos no glomérulo induzida pelo lúpus sistêmico causa injúria aos podócitos glomerulares e descolamento de suas proteínas na urina. Objetivos: Os objetivos deste estudo foram quantificar o nível do RNAm das proteínas associadas ao podócito no tecido renal e no sedimento urinário na NL, e correlacioná-lo com as classes histológicas, inflamação e proteinúria. Métodos: Foram incluídos 33 pacientes portadores de NL em atividade. A expressão do RNAm das proteínas específicas do podócito foi quantificada para nefrina, podocina, podocalixina, alfa-actinina 4, transient receptor potential cation channel 6 (TRPC-6), Forkhead box P 3 (FOXP3), fator de crescimento vascular endotelial A (VEGF-A) e fator de crescimento transformador beta (TGF-β1) através da reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR). Foram utilizadas amostras de tecido renal e sedimento urinário dos pacientes com NL. O infiltrado inflamatório da biópsia renal foi fenotipado identificando-se macrófagos CD68 + , linfócitos T citotóxicos CD8+ e células B CD20+ . O RNAm do VEGF-A, FOXP3 e TGF-β, associado a lesão proliferativa, densidade do infiltrado celular e fibrose renal, respectivamente, também foi mensurado. O RNAm dos marcadores do podócito foi correlacionado com a proteinúria, função renal e título do anti-DNAds. Resultados: O RNAm das moléculas associadas ao podócito (exceto VEGF-A e FOXP3) foi significativamente menos expresso no tecido renal nos casos de NL em relação aos controles. No tecido, não houve diferença dos níveis do RNAm entre as classes histológicas, agrupadas por gravidade da nefrite (I e II vs. III, IV e V). Na urina, a quantidade de RNAm dos marcadores podocitários (exceto alfa actinina-4 e TRPC6), de TGFβ1, VEGF-A e FOXP3 foi significativamente maior nos pacientes com NL, e esse aumento foi determinado pelas classes III, IV e V. A correlação entre o RNAm do TGFβ1 e VEGF-A foi forte, tanto na biópsia renal quanto no sedimento urinário. O RNAm na urina da nefrina, podocina, podocalixina,TGFβ1 e FOXP3 correlacionou-se com a proteinúria, mas não com a duração da doença, função renal ou título de anti-DNAds. A densidade das células T CD8+ no infiltrado túbulo-intersticial (TI) e intraglomerular (IG) foi significativamente maior nas classes III, IV e V comparado as classes I e II (p=0,026 e p=0,012, respectivamente). O RNAm na urina da nefrina, podocina, podocalixina e alfa actinina-4 correlacionou-se com as células CD8+ , CD20+ e CD68+ do infiltrado inflamatório. Na biópsia, somente houve correlação entre as células CD8+ e TGFβ1, FOXP3 (TI) e nefrina e alfaactinina-4 (IG). A densidade do infiltrado inflamatório foi maior nos pacientes com proteinúria em nível nefrótico em relação aqueles com proteinúria subnefrótica para todos os fenótipos celulares estudados. Conclusão: Nestes pacientes com NL ativa foi detectada redução de marcadores do podócito no tecido renal, o que é compatível com podocitopenia, e concomitantemente aumento de sua excreção na urina, sugerindo a presença de podocitúria. A podocitúria foi de maior magnitude nos pacientes com NL com depósitos endocapilares e/ou subepiteliais, o que sugere correlação entre a podocitúria e essas classes histológicas da NL, nas quais a injúria ao podócito é potencialmente mais grave.

Background: The etiopathogenesis of lupus nephritis is not clear yet. Immune complexes deposition in the glomerulus, induced by systemic lupus, causes injury to glomerular podocytes and detachment of their proteins in urine. Aims: The aims of this study were to quantify the level of mRNA of the podocyte-associated proteins in kidney tissue and urine in LN, and to correlate the mRNA of podocyte markers with histological classes, inflammation and proteinuria. Methods: Thirty-three patients with active LN were included in this study. The mRNA levels of the podocyte-associated proteins, nephrin, podocin, podocalixin, alpha-actinin 4, transient receptor potential cation channel 6 (TRPC-6), as well as the mRNA levels of Forkhead box P 3 (FOXP3), vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) e transforming growth factor beta (TGF-β) were quantified by real time polymerase chain reaction (RT-PCR). Kidney tissue from biopsies and urinary sediment cells were utilized as samples. The inflammatory infiltrated in the renal biopsies were phenotyped identifying CD68+ macrophages, CD8+ T cytotoxic lymphocytes e CD20+ B cells. The mRNA levels of VEGF-A, FOXP3 e TGF-β1 which is associated with proliferative lesions, density of the cellular infiltrate and renal fibrosis, respectively, was also measured. Messenger RNA levels of podocyte markers were correlated with proteinuria, renal function and anti-dsDNA titers. Results: Messenger RNA of podocyte-specific molecules (except for VEGF-A and FOXP3) was significantly lower expressed in the renal tissue in cases of LN as compared to controls. In kidney tissue, there was no difference in mRNA levels among the histological classes, which were grouped according to the severity of nephritis (I and II vs. III, IV and V). In urine, the amount of mRNA of podocyte markers (except for alpha actinin-4 and TRPC6), TGFβ1, VEGF-A and FOXP3 was significantly higher in patients with LN, in account of the classes III, IV and V. The correlation between mRNA of TGF-β1 and VEGF-A was strong, both in kidney biopsy and in the urinary sediment. Urinary mRNA levels of nephrin, podocin, podocalyxin, TGF-β1 and FOXP3 correlated with proteinuria, but not with disease duration, renal function or anti-dsDNA titers. The density of CD8+ T cells either in the tubulointerstitial (TI) and in the intraglomerular (IG) compartments was significantly higher in classes III, IV and V as compared to classes I and II (p=0.026 and p=0.012, respectively). Urine mRNA of nephrin, podocin, podocalyxin and alpha actinin-4 correlated with CD8+ , CD20+ and CD68+ cells of the inflammatory infiltrate. In kidney biopsies, there was only a correlation between CD8+ T cells and TGF-β1 and FOXP3 (TI) and nephrin and alpha actinin-4 (IG). The density of the inflammatory markers was higher in patients with nephrotic range proteinuria for all studied cell phenotypes as compared to those with subnephrotic proteinuria. Conclusion: In these patients with active LN there was a reduction in tissue levels of podocyte markers suggesting intra-renal podocytopenia, with a concomitant increase of podocyte-associated mRNAs in urine, indicating the presence of podocyturia. Podocyturia was of a greater magnitude in patients with endocapillary and/or subepithelial deposits, suggesting the existence of a correlation between podocyturia and these histological class of LN, in which the podocyte injury is potentially more severe.