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Vitrificação de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro e expostos à citocalasina B

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Vitrificação de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro e expostos à citocalasina B

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Título Vitrificação de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro e expostos à citocalasina B
Outro título Vitrification of oocytes and in vitro produced bovine embryos exposed to cytochalasin B
Autor Mezzalira, Alceu
Vieira, Arnaldo Diniz
Barbieri, Dilmar Paulo
Machado, Mariana Fernandes
Thaler Neto, André
Bernardi, Mari Lourdes
Silva, Carlos Antonio Mondino
Rubin, Mara Iolanda Batistella
Resumo Foi avaliada a influência da citocalasina B na vitrificação de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro. No Experimento I, 956 oócitos foram maturados por 22h, sendo imediatamente vitrificados (tratamento Vitri) ou expostos por 15 a 20 minutos, à solução com 7,5μg/mL (tratamento CB7,5Vitri) ou 45μg/mL (tratamento CB45Vitri) de citocalasina B, antes da vitrificação. Após 30 segundos de exposição à SV1 [400μl TCM-Hepes com 10% soro fetal (SF), 50μl etilenoglicol (EG) e 50μl DMSO], e 20 segundos à SV2 (300μl trealose 1,0M + 20% SF, 100μl EG e 100μl DMSO), os oócitos foram vitrificados em palhetas estiradas (OPS). O reaquecimento foi realizado a 37-38ºC em duas etapas de 5 minutos cada, em trealose 0,3M e 0,15M. Não houve diferenças (P>0,05) nos percentuais de clivagem e desenvolvimento embrionário entre os tratamentos Vitri, Cito7,5Vitri e Cito45Vitri, os quais foram inferiores (P<0,05) ao controle. No Experimento II, 269 blastocistos expandidos foram distribuídos em 3 tratamentos. No tratamento Vitri, os embriões foram expostos por 1 minuto à SV1 e 20 segundos à SV2, a qual foi modificada pela substituição da trealose por TCM-Hepes. No tratamento CB45Vitri, a vitrificação ocorreu após exposição de 10 minutos à solução com 45μg/mL de citocalasina B. Não foram observadas diferenças (P>0,05) no percentual de re-expansão e eclosão entre os grupos Vitri e CB45Vitri, os quais foram inferiores (P<0,05) ao grupo controle. Os resultados indicam que, independentemente da dose utilizada, a exposição a citocalasina B não produz efeito benéfico na vitrificação de oócitos ou blastocistos bovinos produzidos in vitro.
Abstract In this study, the influence of cytochalasin B on the survival and development after vitrification of oocytes and in vitro produced (IVP) bovine blastocysts was evaluated. In the Experiment I, 956 oocytes were matured for 22h and were immediately vitrified (Vitri treatment) or exposed for 15-20 minutes, to 7.5μg/ml (CB7.5Vitri treatment) or 45μg/ml (CB45Vitri treatment) cytochalasin B solutions, before vitrification. After 30 seconds of exposure to SV1 [400μl TCM-Hepes with 10% fetal serum (SF), 50μl ethylene glycol (EG) and 50μl DMSO], and 20 seconds to SV2 (300μl trehalose 1,0M + 20% SF, 100μl EG and 100μl DMSO) solutions, the oocytes were vitrified in Open Pulled Straws (OPS). The rewarming was performed at 37-38ºC in two steps of 5 minutes each, into 0.3 and 0.15M trehalose solutions, respectively. There was no difference (P>0.05) in the cleavage and embryo rates between Vitri, Cito7.5Vitri and Cito45Vitri treatments, which were inferior to control group (P<0.05). In the Experiment II, 269 expanded blastocysts were distributed into three treatments. In the Vitri treatment blastocysts were exposed for 1 minute to SV1 and for 20 seconds to SV2 solution, the later one modified using TCM-Hepes instead of trehalose. In the CB45Vitri treatment, embryos were vitrified after being exposed to a 45μg/ml cytochalasin B solution for 10 minutes. The re-expansion and hatching rates were similar to Vitri and CB45Vitri treatments (P>0.05), which were lower than those observed in the Control group (P<0.05). The results show that, independently of dose studied (7.5 or 45mg/ml), cytochalasin B has not a beneficial effect to the vitrification of oocytes and IVP bovine blastocysts.
Contido em Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science. Vol. 39, n. 5 (2002), p. 260-265
Assunto Bovino
Cultura in vitro
Embriao
Melhoramento genetico animal
[en] Bovine
[en] Cytochalasin B
[en] Embryos
Origem Nacional
Tipo Artigo de periódico
URI http://hdl.handle.net/10183/99236
Arquivos Descrição Formato
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