Efeito da presença de ocratoxina A em vinho tinto sobre perfil fenólico, atividade antioxidante in vitro e marcadores de danos oxidativos em Caenorharbditis elegans Porto Alegre 2019

Abstract

O consumo de vinho tinto tem crescido noss últimos anos em função de suas características sensoriais e funcionais, sendo esta última associada às concentrações consideráveis de compostos fenólicos, entre eles, flavonóides, antocianinas, flavonóis, ácidos fenólicos e estilbenos. Um dos principais contaminantes deste produto é a micotoxina ocratoxina A (OTA), produzida por fungos dos gêneros Aspergillus e Penicillium e com efeitos tóxicos conhecidos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da presença de OTA em vinho Cabernet Sauvignon sobre o perfil de compostos fenólicos, atividade antioxidante in vitro e efeito sobre marcadores de danos oxidativos em Caenorhabditis elegans. O vinho Cabernet Sauvignon livre de OTA foi adicionado de concentrações crescentes da OTA (1, 2 e 4 μg L-1) e os ensaios realizados 24h após a adição da micotoxina. As amostras de vinho foram submetidas a análise de identificação e quantificação dos compostos fenólicos utilizando Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, acoplado ao Detector de Arranjo de Diodos e ao espectrômetro de massas (HPLC-DAD/MS). O potencial antioxidante in vitro do vinho foi avaliado pelos ensaios da 2-desoxirribose, oxidação da glutationa (GSH), método ABTS e método ORAC. A avaliação de dano oxidativo in vivo foi realizada utilizando o nematoide C. elegans através de exposição dos vermes às amostras por 30 minutos. Após a exposição, a taxa de sobrevivência, geração de espécies reativas de oxigênio (EROs), lipoperoxidação (LPO) e expressão das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) foram avaliadas.O vinho livre de OTA apresentou elevado potencial antioxidante em todos os ensaios in vitro (p ≤ 0,05) e foram identificados e quantificados 23 compostos fenólicos (11 antocianinas, 3 flavonols, 7 ácidos fenólicos e 2 derivados estilbenos) A adição de OTA em todas as concentrações induziu aumento (p ≤ 0,05) na geração do radical hidroxil (•OH) e reduziu a capacidade do vinho de proteger a GSH da oxidação induzida pelo H2O2. Concomitantemente, o vinho em presença de OTA apresentou menores níveis (p ≤ 0,05) de flanonols, antocianinas e ácidos fenólicos quando comparado ao vinho livre de OTA. A adição de OTA ao vinho tinto induziu uma menor geração de EROs e isso pode estar associado ao aumento da expressão da SOD (p ≤ 0,05) quando comparado ao vinho livre de OTA. A expressão de CAT foi alterada (p ≤ 0,05) apenas na menor concentração de OTA (1 μg L-1), o que pode estar associado ao aumento dos níveis de LPO observadas neste grupo. Assim, o presente estudo demonstra a importância de se avaliar a interação entre compostos benéficos e contaminantes presentes na dieta humana.

The consumption of red wine has grown in recent years due to its sensorial and functional characteristics, the latter being associated with considerable phenolic compounds concentrations among them flavonoids, anthocyanins, flavonols, phenolic acids and stilbenes. One of the main contaminants of this product is mycotoxin ochratoxin A (OTA), produced by fungi of the strain Aspergillus and Penicillium and with known toxic effects. The objective of this work was to evaluate the OTA effect OTA on Cabernet Sauvignon wine on the phenolic compounds profile, antioxidant activity in vitro and effect on markers of oxidative damage in Caenorhabditis elegans. OTA-free Cabernet Sauvignon wine was added with increasing concentrations of OTA (1, 2 and 4 μg L-1) and trials performed 24 hours after addition of mycotoxin. The wine samples were submitted to phenolic compounds identification and quantification using high performance liquid chromatography, coupled to the Diodes Array Detector and the mass spectrometer (HPLC-DAD / MS). The in vitro antioxidant potential of the wine was evaluated by the 2-deoxyribose assays, glutathione oxidation (GSH), ABTS method and ORAC method. In vivo oxidative damage assessment was performed using the nematode C. elegans by exposing the worms to the samples for 30 minutes. After the exposure, the survival rate, reactive oxygen species (ROS) generation, lipid peroxidation (LPO) and antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) expression were evaluated. OTA-free red wine had a high antioxidant potential in all in vitro tests (p ≤ 0.05) and 23 phenolic compounds (11 anthocyanins, 3 flavonols, 7 phenolic acids and 2 stilbene derivatives) were identified and quantified 0TA addition at all concentrations induced increase (p ≤ 0.05) in hydroxyl (OH) radical generation and reduced the wine's ability to protect GSH from oxidation induced by H2O2. Concomitantly, wine in OTA presence presented lower levels (p ≤ 0.05) of flanonols, anthocyanins and phenolic acids when compared to OTA-free wine. OTA addition to red wine induced a lower ROS generation and this may be associated with increased SOD expression (p ≤ 0.05) when compared to OTA-free wine. CAT expression was altered (p ≤ 0.05) only in the lower OTA concentration (1 μg L-1), which may be associated with LPO levels increase in this group. Thus, the present study demonstrates the importance of evaluating the interaction between beneficial compounds and contaminants present in the human diet.