Avaliação do potencial probiótico de bactérias lácticas isoladas de leite de búfala

Abstract

Bactérias ácido-lácticas (BALs) são microrganismos de grande importância para a indústria de alimentos, visto que estão geralmente associados à atividade funcional, como culturas potencialmente probióticas ou starters. O crescente interesse por alimentos funcionais faz com que se busquem novas linhagens com tal potencial. Concomitantemente, a produção bubalina no Brasil vem aumentando significativamente nas últimas décadas, bem como o consumo de derivados do leite de búfala; entretanto há uma escassez de informação sobre o potencial probióticos de BALs provenientes do leite desses animais. Portanto, neste trabalho, a diversidade de BALs em amostras de leite cru de búfala de dois laticínios gaúchos foi avaliada por cultivo seguido de MALDI-TOF/MS e sequenciamento parcial do gene 16S rDNA. Onze isolados foram selecionados como possíveis candidatos a probiótico, e a inocuidade dos mesmos foi analisada através da avaliação de atividade hidrolítica, susceptibilidade a antimicrobianos por disco difusão, e presença de genes de virulência por reações em cadeia da polimerase (PCR). Tais testes permitiram a identificação de seis cepas inócuas. Destas, dois isolados – L. rhamnosus LB1.5 e L. paracasei LB6.4 –, foram selecionados para avaliação do seu potencial probiótico em testes in vitro, para determinação de sua capacidade de adesão, agregação e tolerância às condições adversas do trato gastrintestinal (TGI). Ambas as cepas demonstraram características que sugerem seu potencial probiótico. Além disso, foi possível determinar o efeito do estresse ácido na expressão de genes alvo de L. rhamnosus LB1.5 e L. paracasei LB6.4, para melhor compreender a resposta transcricional destas bactérias frente às condições adversas do TGI humano.

Lactic acid bacteria (LAB) are important microorganisms for the food industry, as they are generally associated with functional activity, such as probiotic and stater cultures. The crescent interest for functional food has led industry to search for novel probiotic candidates. Meanwhile, buffalo production is growing significantly for the last decades in Brazil, as well as bubaline milk and derivatives consumption; however there is still a gap on probiotic potential of LAB isolated from raw buffalo milk. Therefore, we analyzed the LAB diversity in fresh milk samples from two dairy industries by culture followed by MALDI-TOF/MS and partial 16S rDNA sequencing. We selected 11 strains as probiotic candidates. An innocuity assessment was performed by hidrolytic activity tests, susceptibility to antibiotics by disc diffusion method, and presence of virulence factors by polymerase chain reactions (PCR) assay. This screening allowed the identification of six innocuous strains, and two with advantageous features were selected for further probiotic potential analyses: L. rhamnosus LB1.5 e L. paracasei LB6.4. Their adhesion and aggregation abilities were assessed, as well as their tolerance to the conditions of the gastrointestinal tract. Both demonstrated features that suggest their probiotic potential. Furthermore, the relative expression of target genes in acid stress was analyzed, so we can better understand the transcriptional response of those isolates to the human gastrinstestinal conditions.