Análise da inibição proliferativa de PBMC caninas em meios condicionados de ADSC submetidas à fototerapia com laser de baixa potência e líquido sinovial osteoatrítico

Abstract

A osteoartrite (OA) é uma doença degenerativa que promove o desequilíbrio da homeostasia articular. As células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (ADSC) podem ter significativos efeitos imunomodulatórios, principalmente quando associadas à fototerapia com laser de baixa potência (FTBP). A terapia com ADSC tem sido utilizada em medicina veterinária como tratamento para a OA. No entanto, pouco se sabe sobre as consequências dessas interações celulares nesse microambiente. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo analisar a inibição proliferativa de células mononucleares de sangue periférico (PBMC) caninas em meios condicionados de ADSC submetidas à FTBP e líquido sinovial osteoartrítico (LSOA). Para isso, ADSC foram submetidas à FTBP e cultivadas com líquido sinovial (LS). Os meios condicionados resultantes foram adicionados a cultivos de proliferação de PBMC induzida com Concanavalina A (ConA) e realizadas leituras em citometria de fluxo. Observou-se alteração morfológica com aumento da confluência de ADSC em todos os grupos contendo LS e aparentemente mais acentuada em LSOA. Na análise de inibição proliferativa de PBMC caninas submetidas aos meios condicionados dos cultivos de ADSC com LS e ADSC em 20% de soro fetal bovino (SFB) sem LS, observou-se ausência de células aos cinco dias de cultivo. Através da citometria, verificou-se maior inibição proliferativa de PBMC submetidas a meios condicionados de ADSC irradiadas sem LS. Com os dados obtidos sugere-se que ADSC submetidas a microambientes contendo LS ou 20% de SFB, se proliferam de forma mais acentuada do que quando comparadas às outras condições experimentais. Além disso, estímulos oriundos da FTBP sob ADSC, parecem ser eficazes em promover atividade imunomodulatória, reduzindo a proliferação de PBMC caninas, quando submetidas a esses meios condicionados. No entanto, devido ao pequeno número amostral e ao grande conjunto de variáveis, indicam-se novos trabalhos de avaliação de diferenciação e proliferação de ADSC sob essas condições, assim como a mensuração dos fatores imunomodulatórios secretados por essas células, nesses microambientes, lançando-se mão de maior enriquecimento de meio para PBMC e redução dos períodos de incubação.

Osteoarthritis (OA) is a degenerative disease that promotes joint homeostasis imbalance. Mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (ADSC) can have significant immunomodulatory effects, especially when associated with low-level laser phototherapy (FTBP). ADSC therapy has been used in veterinary medicine as a treatment for OA. However, little is known about the consequences of these cellular interactions in this microenvironment. Therefore, the present study aimed to analyze the proliferative inhibition of canine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in conditioned media of ADSC submitted to FTBP and osteoarthritic synovial fluid (LSOA). For this, ADSC were submitted to FTBP and cultured with synovial fluid (LS). The resulting conditioned media were added to cultures of PBMC proliferation induced with Concanavalin A and readings in flow cytometry were performed. There was a morphological change with an increase in the confluence of ADSC in all groups containing LS and apparently more accentuated in LSOA. In the analysis of proliferative inhibition of canine PBMC submitted to the conditioned media of the ADSC cultures with LS and ADSC in 20% fetal bovine serum (SFB) without LS, an absence of cells was observed at five days of culture. Through cytometry, there was a greater proliferative inhibition of PBMC submitted to conditioned media of ADSC irradiated without LS. With the data obtained, it is suggested that ADSC subjected to microenvironments containing LS or 20% SFB, proliferate more shaply than when compared to other experimental conditions. In addition, stimuli from FTBP under ADSC appear to be effective in promoting immunomodulatory activity, reducing the proliferation of canine PBMC, when subjected to these conditioned media. However, due to the small sample size and the large set of variables, new studies to assess the differentiation and proliferation of ADSC under these conditions are indicated, as well as the measurement of the immunomodulatory factors secreted by these cells in these microenvironments, launching greater medium enrichment for PBMC and reduced incubation periods.