Avaliação da frequência de polimorfismos dos genes GDF-9 (c.398-39C>G, c.436C>T, c.447C>T, c.546G>A, c.557C>A e c.646G>A), AMH (p.Ile49Ser) E AMHR2 (–482A>G) em mulheres inférteis com endometriose

Abstract

Introdução: O Fator de Crescimento e Diferenciação 9 (GDF-9) e o Hormônio AntiMülleriano (AMH) são membros da superfamília TGF-β envolvidos na foliculogênese e têm função determinante no desenvolvimento oocitário e na reserva ovariana. Polimorfismos nesses genes apresentam importante papel na fertilidade feminina, pois foi demonstrado estarem relacionados com subfertilidade/infertilidade e antecipação da menopausa. A endometriose cursa com dois sintomas principais: dor pélvica crônica e infertilidade, sua ligação com a infertilidade ainda não foi claramente elucidada, sendo sugerido que uma série de fatores podem influenciar este processo, entre eles, os fatores da superfamília TGF-β. Objetivos: Avaliar se os polimorfismos genéticos do GDF-9, AMH e do seu receptor AMHR2 estão correlacionados com infertilidade associada à endometriose. Métodos: Um estudo caso-controle foi realizado, incluindo 50 mulheres inférteis com endometriose e 50 mulheres férteis submetidas à laparoscopia para ligadura tubária como grupo controle. Critérios de não inclusão utilizados: doenças autoimunes, coexistência de outras causas de infertilidade, amenorreia ou ciclos irregulares. Foi realizada a dosagem de FSH no terceiro dia do ciclo e sangue periférico foi coletado para extração de DNA e genotipagem. Os polimorfismos c.398-39C>G, c.436C>T, c.447C>T, c.546G>A, c.557C>A e c.646G>A do gene GDF-9 foram determinados por sequenciamento direto e os polimorfismos p.Ile49Ser do AMH e –482A>G do AMHR2 foram determinados por genotipagem usando kits comerciais Taqman® Resultados: A idade foi similar entre os grupos (33,5±5,2 x 33,9±4,0 anos; P=0,847). A média dos níveis de FSH não resultou em significância estatística (6,42±2,5 x 5,12±2,9 mUI/mL; P=0,064). A frequência genotípica entre os grupos para os polimorfismos do gene GDF-9 demonstra nível de significância de P=0,433 para c.398-39C>G, P=0,129 para c.447C>T e P=0,794 para c.546G>A. Entretanto, a frequência genotípica dos polimorfismos dos genes AMH e AMHR2 apresentaram, respectivamente, P=0,096 e P=0,140, representando uma tendência estatística. Todos os SNPs foram testados e estavam de acordo para o Equilíbrio de HardyWeinberg. Conclusão: O presente estudo não mostrou diferença na frequência alélica ou genotípica dos SNPs nos genes GDF-9, AMH e AMHR2 em pacientes inférteis com endometriose. Contudo, demonstramos que existe possibilidade das alterações c.447C>T e c.546G>A do gene GDF-9, p.Ile49Ser do AMH e –482A>G do gene AMHR2 influenciarem a fertilidade na endometriose.

Background: The Growth and Differentiation Factor 9 (GDF-9) and the AntiMüllerian Hormone (AMH) are members of the TGF-β superfamily involved in folliculogenesis and have a decisive role in oocyte development and ovarian reserve. Polymorphisms in these genes have important role in female fertility because it was demonstrated to be related to subfertility/infertility and anticipation of menopause. Endometriosis progresses with two main symptoms: chronic pelvic pain and infertility. It’s link to infertility has not been yet clearly elucidated, although it’s suggested that a number of factors may influence this process, including the factors of the TGF-β superfamily. Objectives: To evaluate whether genetic polymorphisms (SNPs) of GDF-9, AMH and its receptor AMHR2 correlates with endometriosis associated to infertility. Methods: A case-control study was performed, including 50 infertile women with endometriosis and 50 fertile women undergoing laparoscopy for tubal ligation as a control group. Non-inclusion criteria were: autoimmune diseases, coexistence of other causes of infertility, amenorrhea or irregular cycles. The dosage of FSH was performed on the third day of the cycle and peripheral blood was collected for DNA extraction and genotyping. Polymorphisms c.398-39C>G, c.436C>T, c.447C>T, c.546G>A, c.557C>A and c.646G>A of GDF-9 gene were determined by direct sequencing technique and polymorphisms p.Ile49Ser of gene AMH and -482A>G of AMHR2 were determined by genotyping by using commercial Taqman® kits Results: The mean of ages were similar between groups (33.5±5.2 x 33.9±4.0 years, P=0.847). The Follicle Stimulating Hormone (FSH) mean levels did not result in statistical significance (6.42±5.12 x 2.5±2.9 mIU/ml, P=0.064). The genotypic frequency GDF-9 gene polymorphisms demonstrated a significance level of P=0.433 for c.398-39C>G, P=0.129 for c.447C>T and P=0.794 for c.546G>A. However, the genotypic frequency of AMH and AMHR2 genes polymorphisms presented, respectively, P=0.096 and P=0.140, representing a statistical trend. All SNPs were measuring according to Hardy- Weinberg Equilibrium. Conclusion: This study showed no difference in allelic or genotypic frequency of GDF-9, AMH and AMHR2 genes SNPs in infertile patients with endometriosis. However, there are possible alterations in c.447C>T and c.546G>A GDF-9 gene, p.Ile49Ser AMH gene and SNP -482A>G AMHR2 gene. Taken together, these data may suggest the influence of some genetic polymorphisms in infertility associated with endometriosis.