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Estudos com o jaburetox : efeito tóxico de e. coli liofilizadas carregadas com o peptídeo e análise da influência do epitopo v5 na formação de agregados

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Estudos com o jaburetox : efeito tóxico de e. coli liofilizadas carregadas com o peptídeo e análise da influência do epitopo v5 na formação de agregados

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Título Estudos com o jaburetox : efeito tóxico de e. coli liofilizadas carregadas com o peptídeo e análise da influência do epitopo v5 na formação de agregados
Autor Kappaun, Karine
Orientador Carlini, Celia Regina Ribeiro da Silva
Co-orientador Martinelli, Anne Helene Souza
Data 2011
Nível Graduação
Instituição Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Faculdade de Farmácia. Curso de Farmácia.
Assunto Escherichia coli
Jaburetox
Peptídeos
Resumo Ureases (E.C. 3.5.1.5) são enzimas níquel dependentes que estão envolvidas na biodisponibilidade de nitrogênio e em mecanismos de defesa contra predadores e patógenos em plantas. Nosso grupo descreveu a atividade inseticida da Canatoxina, uma isoforma da urease de Canavalia ensiformis. Essa toxicidade depende da liberação de um peptídeo interno de 10 kDa, o Pepcanatox, que é liberado pela hidrólise da proteína por enzimas digestivas do tipo-catepsinas dos insetos suscetíveis. Baseado no sequência N-terminal do Pepcanatox, um fragmento de 270 pb correspondente ao pepcanatox foi clonado e expresso em Escherichia coli. Este peptídeo denominado Jaburetox-2Ec, fusionado com um epitopo V5 e seis histidinas na região C-terminal foi testado contra insetos e causou 100% de mortalidade em modelos como Dysdercus peruvianus, e Spodoptera frugiperda após a ingestão de microgramas do peptídeo purificado. A fim de retirar o epitopo V5 da sequência do peptídeo, a sequência de DNA do Jaburetox-2Ec foi reamplificado por PCR, clonado em plasmídeo pET23a obtendo o peptídeo adicionado apenas da cauda de seis histidinas, o Jaburetox-V5. Nesse trabalho foi testada a atividade inseticida de E. coli liofilizadas, carregadas com o Jaburetox-V5, contra insetos modelo que se mostraram suscetíveis ao Jaburetox-2Ec (D. peruvianos e S. frugiperda), bem como contra o Aedes aegypti. Além disso, foi analisado se o epitopo V5 influencia na agregação do peptídeo purificado, pela comparação entre o Jaburetox-2Ec e Jaburetox-V5 por SDS-PAGE a 15% durante 4 semanas, com os peptídeos armazenados em diferentes tampões e em duas temperaturas, 4°C e -20°C. Os resultados demonstraram letalidade do peptídeo acumulado na célula bacteriana liofilizadas apenas contra o mosquito A. aegypti e que há influência do epitopo V5 no processo de agregação dos peptídeos.
Tipo Trabalho de conclusão de graduação
URI http://hdl.handle.net/10183/70125
Arquivos Descrição Formato
000865087.pdf (820.3Kb) Texto completo Adobe PDF Visualizar/abrir

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